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titulo: Clonagem do cDNA da mioglobina de rato e regulação de sua expressão por hormônio tireoideano na musculatura esquelética.

linha: Regulação de expressão gênica por hormônio tireoideano e metabólitos

projeto: Papel dos hormônios tireoideanos na regulação da expressão da mioglobina em músculo esquelético de ratos

area: Fisiologia Endócrina

biblioteca: Biblioteca do Instituto de Ciências Biomédicas - USP
volumes: 1
num_paginas: 79
idioma: Português
palavras_chave: mioglobina; hormônio tireoideano; clonagem; músculos esqueléticos; mRNA

resumo:   O tecido muscular esquelético é composto por tipos de fibras musculares que apresentam propriedades
bioquímicas e funcionais distintas. Basicamente, as fibras são classificadas em tipo I - fibras de contração lenta e metabolismo oxidativo; tipo IIa - fibras de contração rápida e metabolismo oxidativo e glicolítico; tipo IIb - fibras de contração rápida e metabolismo glicolítico. Estudos têm demonstrado que os hormônios tireoideanos convertem fibras de contração lenta em rápida, porém a expressão da mioglobina, uma proteína altamente expressa em fibras do tipo I e indício de capacidade oxidativa do músculo, foi demonstrada ser incrementada mesmo com a conversão do tipo de fibra. Esse estudo objetivou melhor caracterizar o efeito dos hormônios tireoidean os sobre o gene da mioglobina
e investigar os mecanismos envolvidos neste processo.
  Ratos machos foram tireoidectomizados e tratados com 0,03% de metimazol (hipotireoideos) ou falsamente
tireoidectomizados e receberam injeções intraperitoneais de T3 (hipertireoideos) ou de salina (eutireoideos).
Para o tratamento crônico empregamos injeções ip. de 25 ug de T3/ 100 g de peso corporal, para o grupo
hipertireoideo, e de salina para os grupos eu e hipotireoideos por 15 dias. Para o estudo com doses crescentes de T3 utilizamos doses de 0,3; 1,0; 5,0; 12,5; 25; 50 e 100 ug de T3/ 100 g por 2 horas ou 5 dias.
  Foi realizado, também, um estudo para a avaliação temporal da ação do T3 sobre a expressão do gene da Mb,estudo no qual doses de 100 ug de T3/ 100 g foram administradas endovenosamente aos animais seguindo sacrifício após 30, 60, 120 minutos, 6 e 24 horas. Para avaliar se o mecanismo de ação do T3 envolvia a via da calcineurina (CNA), enzima indutora de genes específicos de fibra de contração lenta, foram administrados doses de 0,5 mg/ 100 g de ciclosporina A, um inibidor da calcineurina, em animais hipo, eu e hipertireoideos, por 42 dias. Além desse parâmetro, também foi estudado a influência da atividade mitocondrial sobre a expressão da Mb; para tal essa atividade foi inibida pela administração de 42 mg/ 100 g de cloranfenicol, por 4 dias, em animais hipo, eu e hipertireoideos. A expressão do gene da miogenina, uma proteína transcricional que poderia mediar a ação do T3 sobre a expressão do gene da Mb,
também foi avaliada em estudos com administração crônica do hormônio tireoideano.
  Estudos crônicos utilizando ratos hipo, eu e
hipertireoideos demonstraram que os HT são essenciais para a expressão basal desse gene nos dois músculos
estudados e que o conteúdo de mRNA da Mb aumenta com administração de 25 ou 50 ug de T3/ 100 g de
peso corporal, ip, por 5 ou 15 dias, no solear e somente no 3º e 4º dia da administração de 25ug de T3/ 100 g no EDL. Doses saturantes de T3 (100 ug/ 100 g, ev) não evidenciaram aumento da expressão desse gene em ratos hipotireoideos até 24 horas do tratamento.
  Estudos com a desnervação de uma das patas posteriores dos animais evidenciaram um provável efeito inibitório
da inervação sobre a expressão do gene da Mb, tanto no solear como no EDL, no entanto, a inervação se mostrou
necessária para a manifestação dos efeitos do T3 sobre o gene da Mb. O tratamento dos ratos com ciclosporina A,
associado ou não com T3 demonstrou que o bloqueio da CNA não impediu a ação do T3. O bloqueio da atividade mitocondrial, por cloranfenicol, induziu aumento do conteúdo de Mb nos animais  hipertireoideos, sugerindo que o efeito do T3 independe de síntese de protéinas mitocondriais.
  Os resultados obtidos demonstram que a administração crônica de T3 aumenta a expressão do gene da Mb e
sugerem o envolvimento de outros fatores, que não os estudados, como mediadores da expressão desse gene pelo T3.

orientadores: Maria Tereza Nunes

financiadores: bolsa FAPESP (54 meses)

banca: Maria Tereza Nunes
Anselmo Sigari Moriscot
Tânia de Fátima Salvini
José Eduardo Pereira Wilken Bicudo
Ubiratan Fabres Machado