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titulo: Mecanismos de transporte de prótons na linhagem celular de túbulos proximais de ratos IRPTC e sua participação na regulação do pH celular.

linha: Fisiologia e Fisiopatologia Celular

projeto:  Análise da modulação da expressão das isoformas 1, 2 e 3

area: Fisiologia Renal

biblioteca: ICB
volumes: 1
num_paginas: 100
idioma: Português
palavras_chave: Células IRPTC; Túbulo proximal renal;Permutador Na/H; H-ATPase; pH intracelular; Microscopia de Fluorescência

resumo:         O pH intracelular é mantido por diversos sistemas de extrusão de H+ através da membrana plasmática, incluindo o permutador Na+/H+, o trocador Cl-/HCO3-, o cotransportador Na+/HCO3- e a bomba de H+ dependente de ATP. Neste trabalho, procuramos identificar e caracterizar funcionalmente os mecanismos extrusores de H+ independentes de HCO3- na linhagem celular de túbulos proximais de ratos, IRPTC. Para isto, medimos o pH intracelular (pHi) em monocamadas de células cultivadas sobre suportes impermeáveis, utilizando o probe sensível a pH, BCECF e um microscópio de epifluorescência invertido. Estas células têm um pHi basal de 7.08±0.014 (n=14) e após um pulso ácido com NH4Cl, o pHi é recuperado com uma velocidade (dpHi/dt) de 0.14±0.009 unidades de pH por minuto (n=14). Esta velocidade foi significantemente reduzida quando o Na+ foi removido do meio extracelular, bem como após o tratamento das células com Hexametileno-amiloride (HMA), droga que inibe o permutador Na+/H+, apresentando uma velocidade de recuperação de 0.041±0.0036 (n=8) e 0.048±0.0040 (n=11) unidades de pH por minuto, respectivamente. Nas duas condições, a atividade do permutador Na+/H+ manteve-se inibida. Esta recuperação não foi alterada após o tratamento das células com HMA e Schering 28080, sendo o segundo, um inibidor específico de H+/K+-ATPases. Nesta situação a velocidade de recuperação do pHi se manteve em 0.046±0.0044 unidades de pH por minuto (n=12). O mesmo ocorreu quando do tratamento das células IRPTC com HMA e 0.1 mM de Bafilomicina, um inibidor específico de H+-ATPases, onde a recuperação do pHi foi de 0.047±0.0046 unidades de pH por minuto (n=9). No entanto, após a incubação das células em soluções livres de Na+ com N-etilmaleimida (NEM - outro inibidor da H+-ATPase), ou com NEM e EGTA ou com 0.3 mM de Bafilomicina, a velocidade de recuperação do pHi foi significantemente reduzida, atingindo os valores de 0.011±0.00079 (n=7), 0.010±0.00077 (n=6) e 0.008±0.00098 (n=6) unidades de pH por minuto, respectivamente. Estes resultados indicam que as células IRPTC expressam o permutador Na+/H+ e a H+-ATPase, mas não expressam o trocador H+/K+-ATPase.

orientadores: Nancy Amaral Rebouças

financiadores: Bolsa FAPESP (24 meses)

banca: Nancy Amaral Rebouças
Ricardo Fernandez Perez
Gerhard Malnic