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titulo: ASSOCIAÇÃO DA ISOFORMA 3 DO TROCADOR Na+/H+ (NHE3) COM A DIPEPTIDIL PEPTIDASE IV (DPPIV) EM TECIDO RENAL
linha: Fisiologia e Fisiopatologia Celular
projeto: IDENTIFICAÇÃO DE UMA PROTEÍNA QUE SE ASSOCIA À ISOFORMA 3 DO TROCADOR Na+/H+ (NHE3) EM TECIDO RENAL
area: Fisiologia Renal
biblioteca: Biblioteca do Instituto
de Ciências Biomédicas I
volumes: 01
num_paginas: 74
idioma: Português
palavras_chave: Trocador Na/H; Dipeptidil
peptidase IV; Tecido Renal; Imunoprecipitação; Anticorpos
monoclonais; Interação proteína-proteína.
resumo: NHE3 é a isoforma
do trocador Na+/H+ responsável por grande parte da reabsorção
de NaHCO3 e NaCl em túbulos proximais renais. A recente identificação
de proteínas regulatórias que associam-se a este trocador
tem elucidado os mecanismos moleculares envolvidos em sua modulação.
Com a intenção de identificar estas proteínas, anticorpos
monoclonais (mAbs) foram desenvolvidos contra os complexos protéicos
formados com NHE3, isolados de membranas de bordo em escova de túbulos
proximais (BBM). Dez hibridomas foram selecionados com base em sua
habilidade em imunoprecipitar NHE3. Nós caracterizamos um destes
mAbs (1D11) que co-precipita especificamente NHE3 e não outras proteínas
presentes em BBM, como vilina e NaPi-2. Por meio de análises de
"Western blot" de membranas microviliares e microscopia eletrônica
de secções de córtex renal, mostramos que o mAb 1D11
reconhece uma proteína de 110 kDa, altamente expressa em bordo em
escova de túbulos proximais. O antígeno contra o qual
o mAb 1D11 é direcionado foi isolado por cromatografia de imunoafinidade
e o seqüenciamento da porção N-terminal da proteína
isolada permitiu identificá-la como dipeptidil peptidase IV (DPPIV)
(EC 3.4.14.15). Analisamos, a seguir, em que sub-compartimentos da membrana
apical o complexo NHE3-DPPIV está presente. Membranas celulares
renais foram separadas por densidade através de gradiente
de centrifugação utilizando o meio OptiprepTM. Verificou-se
que o complexo NHE3-DPPIV encontra-se preferencialmente expresso no microdomínio
microvilar da membrana de bordo membrana de túbulos proximais renais,
onde NHE3 é ativo.
Em seguida, dedicamos esforços
no sentido de examinar o possível papel fisiológico da associação
de NHE3 com DPPIV. Nossa primeira abordagem consistiu em analisar o efeito
de inibidores específicos de DPPIV, que ligam-se ao sítio
ativo desta enzima, sobre a atividade de NHE3 em células OK, uma
linhagem de células de túbulo proximal do marsupial opossum
(Didelphis marsupialis) que possui propriedades de transporte muito similares
ao túbulo proximal nativo. Nós observamos que os inibidores
de DPPIV inibem a atividade de NHE3 em células OK, sugerindo que
DPPIV pode estar envolvida na regulação de NHE3. Além
disso, nossos resultados evidenciam que a ação proteolítica
de DPPIV está diretamente envolvida na regulação de
NHE3.
orientadores: Nancy Amaral Rebouças
financiadores: FAPESP = 41 meses
banca: Titulares:
Gerhard Malnic
Dulce Elena Casarini
Miriam Boim
Luis Fernando Onuchic
Nancy Amaral Rebouças
atividade_futura: Com vínculo
tipo_instituicao: Instituição
de Ensino e Pesquisa
espectativa_atuacao: Pesquisa
area_titulacao: sim