[Total de meses: 40]

titulo: ASSOCIAÇÃO DA ISOFORMA 3 DO TROCADOR Na+/H+ (NHE3) COM A DIPEPTIDIL PEPTIDASE IV (DPPIV) EM TECIDO RENAL

linha: Fisiologia e Fisiopatologia Celular

projeto: IDENTIFICAÇÃO DE UMA PROTEÍNA QUE SE ASSOCIA À ISOFORMA 3 DO TROCADOR Na+/H+ (NHE3) EM TECIDO RENAL

area: Fisiologia Renal

biblioteca: Biblioteca do Instituto de Ciências Biomédicas I
volumes: 01
num_paginas: 74
idioma: Português
palavras_chave: Trocador Na/H; Dipeptidil peptidase IV; Tecido Renal; Imunoprecipitação; Anticorpos monoclonais; Interação proteína-proteína.

resumo: NHE3 é a isoforma do trocador Na+/H+ responsável por grande parte da reabsorção de NaHCO3 e NaCl em túbulos proximais renais. A recente identificação de proteínas regulatórias que associam-se a este trocador tem elucidado os mecanismos moleculares envolvidos em sua modulação.  Com a intenção de identificar estas proteínas, anticorpos monoclonais (mAbs) foram desenvolvidos contra os complexos protéicos formados com NHE3, isolados de membranas de bordo em escova de túbulos proximais (BBM).  Dez hibridomas foram selecionados com base em sua habilidade em imunoprecipitar NHE3. Nós caracterizamos um destes mAbs (1D11) que co-precipita especificamente NHE3 e não outras proteínas presentes em BBM, como vilina e NaPi-2. Por meio de análises de "Western blot" de membranas microviliares e microscopia eletrônica de secções de córtex renal, mostramos que o mAb 1D11 reconhece uma proteína de 110 kDa, altamente expressa em bordo em escova de túbulos proximais.  O antígeno contra o qual o mAb 1D11 é direcionado foi isolado por cromatografia de imunoafinidade e o seqüenciamento da porção N-terminal da proteína isolada permitiu identificá-la como dipeptidil peptidase IV (DPPIV) (EC 3.4.14.15). Analisamos, a seguir, em que sub-compartimentos da membrana apical o complexo NHE3-DPPIV está presente. Membranas celulares renais foram separadas por densidade através de  gradiente de centrifugação utilizando o meio OptiprepTM. Verificou-se que o complexo NHE3-DPPIV encontra-se preferencialmente expresso no microdomínio microvilar da membrana de bordo membrana de túbulos proximais renais, onde NHE3 é ativo.
Em seguida, dedicamos esforços no sentido de examinar o possível papel fisiológico da associação de NHE3 com DPPIV. Nossa primeira abordagem consistiu em analisar o efeito de inibidores específicos de DPPIV, que ligam-se ao sítio ativo desta enzima, sobre a atividade de NHE3 em células OK, uma linhagem de células de túbulo proximal do marsupial opossum (Didelphis marsupialis) que possui propriedades de transporte muito similares ao túbulo proximal nativo. Nós observamos que os inibidores de DPPIV inibem a atividade de NHE3 em células OK, sugerindo que DPPIV pode estar envolvida na regulação de NHE3. Além disso, nossos resultados evidenciam que a ação proteolítica de DPPIV está diretamente envolvida na regulação de NHE3.

orientadores: Nancy Amaral Rebouças

financiadores: FAPESP = 41 meses

banca: Titulares:
Gerhard Malnic
Dulce Elena Casarini
Miriam Boim
Luis Fernando Onuchic
Nancy Amaral Rebouças

atividade_futura: Com vínculo
tipo_instituicao: Instituição de Ensino e Pesquisa
espectativa_atuacao: Pesquisa
area_titulacao: sim