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titulo: Produção de anticorpos monoclonais e sua aplicação na identificação de marcadores de células da linhagem osteoblástica

linha: Doenças ósseas metabólicas

projeto: Anticorpos Monoclonais para o Estudo de Marcadores de Células da Linhagem Ósteoblastica

area: Fisiologia Geral

biblioteca: Biblioteca do Instituto de Ciências Biomédicas I
volumes: 1
num_paginas: 97
idioma: português
palavras_chave: anticorpos monoclonais; citometria de fluxo; osteoblastos; imunocitoquímica; marcadores de diferenciação celular; hibridomas

resumo: No presente estudo produzimos anticorpos monoclonais (mabs) a partir de células de osteosarcoma humano (MG-63), ou seja, células com características de osteoblastos imaturos. Após fusão e, obtivemos 19 clones positivos. Dos 19, os anticorpos PSP 4-5, PSP 42-22 e PSP 85-9 foram escolhidos e reconhecem, respectivamente, antígenos de 100, 20 e 16 kDa.
O objetivo foi desenvolver mabs contra células da linhagem osteoblástica e identificar possíveis marcadores; avaliar a expressão dos antígenos evidenciados pelos mabs em tecido ósseo normal, tecido adiposo e cardíaco; em células ósseas obtidas de cultura de explante ósseo normal e de pacientes com doenças ósseas metabólicas; além de fibroblastos normais. Os mabs apresentaram marcação semelhante no tecido ósseo e no cartilaginoso. No tecido cardíaco, apesar dos três reconhecerem antígenos de superfície, somente o PSP 85-9 mostrou marcação intensa. No tecido adiposo e nas células fibroblásticas normais observou-se unicamente a expressão dos antígenos detectados pelos mabs PSP 4-5 e PSP 85-9. Nos osteoblastos normais e de pacientes com osteoporose, a marcação foi semelhante para o PSP 4-5 e PSP 85-9. Nos osteoblastos de pacientes com hiperparatireoidismo primário e secundário o PSP 85-9 foi mais intenso que no PSP 4-5. Já nas células provenientes de pacientes com osteomalácia, o PSP 4-5 foi mais intenso do que o PSP 85-9. O PSP 42-22 não marcou nenhuma das células estudadas por imunocitoquímica. Nossos resultados demonstram que esses anticorpos reconhecem antígenos que estão presentes desde células menos diferenciadas (periósteo) até a mais diferenciada (osteócito). Os resultados obtidos na imunocitoquímica demonstram que há também diferenças no padrão de expressão dos antígenos nas diferentes doenças. Alguns desses achados foram confirmados nos testes realizados por citometria de fluxo. Apesar de serem necessários testes minuciosos quanto a especificidade desses anticorpos, concluímos que esses mabs poderiam ser de grande valor no estudo das relações entre as linhagens celulares originárias da mesma célula mesenquimal e na compreensão de mecanismos envolvidos da fisiopatologia de doenças ósseas metabólicas.

orientadores: Vanda Jorgetti

financiadores: Doutorado sanduíche (PDEE- Capes): 8 meses - Auxílio pesquisa (Fapesp): 24 meses

banca: Maria Tereza de Carvalho Pinto Ribela; Maria Tereza Nunes; Victor Elias Arana Chavez; Sumie Hoshino Shimizu; Vanda Jorgetti

vinculo_empregaticio: Com vínculo
tipo_instituicao: Empresa Pública ou Estadual
espectativa_atuacao: Pesquisa
area_titulacao: sim