Ana Rosa
Beltrán González
realname: Ana
Rosa Beltrán González
abreviatura:
Beltrán, GAR
nacionalidade: Outra
anonascimento: 1970
sexo: Femenino
nivel: Doutorado
mes_matricula: 05/2001
mes_defesa: 05
[Total
de meses: 48]
titulo: Estudo
da isoforma 4 do permutador Na/H em células T84:
caracterização funcional e modulação pela
enterotoxina termoestável de E. coli, STa
linha: Transporte de íons em células epiteliais
projeto: Secreção de
potássio em túbulos distais: fatores reguladores
area: Fisiologia Renal e Biofísica
biblioteca: Biblioteca do Instituto de Ciências Biomédicas
(SBiB)
volumes: 1
num_paginas: 156
idioma: Português
palavras_chave: permutador Na/H; Isoforma 4; células
colônicas; enterotoxina, STa; regulação do pHi;
Regulação do volume celular.
resumo: No presente trabalho, identificamos as isoformas do permutador
Na+/H+ em células T84, de colon humano, por técnicas
funcionais e moleculares. O pH celular foi medido por microscopia de
fluorescência usando o indicador BCECF. O ritmo de
extrusão de íons H+ destas células (JH) foi de
3.68 mM/min, medido pela velocidade de recuperação do pH
celular (pHi) após acidificação por pulso de
amônia e pela sua capacidade tamponante. Usando o derivado do
amiloride, HOE-694 25 mM, que inibe as isoformas NHE1 e NHE2, ainda
observamos um remanescente de JH de 43% do fluxo total, cuja natureza
investigamos. O inibidor S2336 (1 mM), bloqueador específico de
NHE3, não teve efeito sobre o JH remanescente; em trabalho
anterior tínhamos verificado por RT-PCR a ausência desta
isoforma das células T84. A presença da isoforma
NHE4 nestas células foi verificada pelas seguintes
observações funcionais: JH foi abolido inteiramente por
EIPA; substituindo NaCl por gluconato de K elevou-se o JH da
fração remanescente, o que não ocorre com outras
isoformas; a hipertonicidade do meio também estimulou o JH
remanescente. Do ponto de vista molecular, evidência da
presença de RNAm da isoforma NHE4 foi obtida por RT-PCR.
Por outro lado, a presença de uma isoforma dependente de Cl- foi
eliminada, já que em meio 0Cl-, JH se elevou em vez de ser
reduzido. Medidas de volume celular mostraram que em meio 0 Cl- o
volume destas células se reduziu, o que foi impedido na
presença do bloqueador de canais NPPB, indicando que o efeito de
0Cl- era devido a redução do volume celular, da mesma
forma que a hipertonicidade.
A enterotoxina estável à temperatura
de E. coli (STa 0.25 mM) é capaz de estimular
secreção de Cl- em células intestinais. Mostramos
que preincubação por 30 min com esta toxina reduziu a
fração remanescente de JH de 73%. Este efeito foi abolido
por H89 10-4M, um bloqueador da PKA. A concentração de
AMPc celular medida por imunoensaio foi significantemente elevada
após preincubação com Sta. Incubação
com uma forma permeante de GMPc não teve este efeito.
Em conclusão, células T84 de colon
humano contém três isoformas do permutador Na+/H+, quais
sejam, NHE1, NHE2 e NHE4, mas não a isoforma dependente de
Cl-. Além disso, o JH devido a NHE4 foi significantemente
reduzido por STa através da via de sinalização
AMPc / PKA.
orientadores: Prof. Dr. Gerhard Malnic
financiadores: Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de
São Paulo- FAPESP. Financiamento durante 48 meses
vinculo_empregaticio: .
tipo_instituicao: .
espectativa_atuacao: Ensino e Pesquisa
area_titulacao: sim
banca:
COMISSÃO JULGADORA
DA TESE
DE DOUTORADO DO(A) CANDIDATO(A)
ANA ROSA BELTRÁN GONZÁLEZ
JUNTO AO PROGRAMA DE FISIOLOGIA
HUMANA DO INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOMÉDICAS DA
UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO
====================================================================================
Titulo da Tese: "Estudo
da isoforma 4
do permutador
Na/H em células T84: caracterização funcional e
modulação pela toxina
termoestável de E. coli,
Sta.”.
Titulares:
1.) Dr. ANTONIO
JOSÉ BARROS MAGALDI
Doutor pela FM/USP,
Professor Colaborador
da Disciplina de Nefrologia do Departamento de Clínica
Médica da Faculdade de
Medicina da Universidade de São Paulo.
2.) Profa.Dra. JEANNINE
ABOULAFIA
Professor Adjunto do Departamento de
Biofísica da Escola Paulista de
Medicina da Universidade Federal de São Paulo.
3.) Profa. Dra. MARIA OLIVEIRA DE SOUZA
Professor
Doutor do
Departamento de Fisiologia e Biofísica do Instituto de
Ciências Biomédicas da
Universidade de São Paulo.
4.). Profa. Dra. SONIA MALHEIROS LOPES
SANIOTO
Professor
Associado
do Departamento de Fisiologia e Biofísica do Instituto de
Ciências Biomédicas
da Universidade de São Paulo.
5.) Orientador(a):
Prof. Dr. GERHARD
MALNIC
Professor
Titular,
aposentado, do Departamento de Fisiologia e Biofísica do
Instituto de Ciências Biomédicas
da Universidade de São Paulo.
====================================================================================
Aprovada pela
Comissão de Pós-Graduação do ICB/USP,
em reunião realizada
a 14 de abril de
2005.
Prof. Dr. José
Cipolla Neto
Presidente